1. 冷冻管应如何解冻？ " I2 ^. j$ M+ [, y+ K

取出冷冻管后， 须立即放入 37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在 1 分钟

内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由

液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。

2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除 DMSO？

除少数特别注明对 DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在

解冻之后， 应直接放入含有 10-15ml 新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜

培养基以去除 DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提

供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。

4. 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于

细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容

物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5. 何谓 FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都

是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指

小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

6. 培养细胞时应使用 5 % 或 10% CO2？或根本没有影响？ 2

一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统， 而培养基中 NaHCO3

的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g

时，细胞培养时应使用 10 % CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时， 则应使用

5 % CO2 培养细胞。

7. 何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即

可。

8. 培养基中是否须添加抗生素？

除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。

9. 附着性细胞继代时所使用之 trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？

一般使用之 trypsin-EDTA 浓度为 0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶

后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 ℃，避免反复冷冻解冻造成 trypsin 之

活性降低， 并可减少污染之机会。

10. 悬浮性细胞应如何继代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可， 若培养液

太多时， 可将培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细

胞之培养液至另一新的培养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤

即可。 ! E7 q. r; _# I2 [

11. 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

欲回收动物细胞， 其离心速率一般为 300xg (约 1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过

高之转速， 将造成细胞死亡。

12. 细胞之接种密度为何？ + l+ M! p: t* R1 ~3 _! z

依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀

释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。