培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则

直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。

如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每

毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入

培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，

形态是否正常，有无污染，培养基的 PH 是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外

对培养温度和 CO2 浓度也要定时检查。

一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞

一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满

瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代

一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限

地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶

性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的

温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚

砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，

细胞保存的时间几乎是无限的。

复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入 37℃水中，使之在

一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。

冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对

细胞活力有影响。