初代组织块培养法

1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用 Hanks 液漂洗二三次以去掉表面

血污，吸静 Hanks 液，用眼科剪反复剪切 1mm3 块为止。

2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培

养瓶底部，小块相互距离以 0.5cm 为宜，每一 25ml 培养瓶底可摆布 20~30 块。

3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置 36.5℃

温箱培养 2 小时左右（勿超过 4 小时），使小块微干涸。

4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46 度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液

少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置

温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

传代培养法

原理

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时

也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下

去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就

可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

材料和试剂 T

1. 细胞：贴壁细胞株 / Z) u2 z7 o) t

2. 试剂：0.25％胰酶、1640 培养基（含 10％小牛血清）

3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等 8 X- _; A' p2

操作步骤- ^. K5 O! K5 k

1. 吸除培养瓶内旧培养液。

2. 向瓶内加入胰蛋白酶和 EDTA 混合液少许，以能覆满瓶底为限。

3. 置温箱中 2~5 分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。

4. 吸除消化液，向瓶内注入 Hanks 液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。

注意加 Hanks 液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白

酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用 Hanks 液冲洗，直接加入培养液。

5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。.

无菌操作注意事项

1. 操作前要洗手，进入超净台后手要用 75%酒精或 0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也

要擦试。

2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼

时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，

以免烧焦形成碳膜。

3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。

4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。

5. 瓶子开口后要尽量保持 45℃斜位。

6. 吸溶液的吸管等不能混用。